ELISA技术自20 世纪70年代初问世以来，发展非常迅速，目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。其基本原理是根据抗原或抗体能在一定条件下结合到固相载体的表面仍保持其免疫活性，抗原或抗体与酶结合形成的结合物仍能保持免疫学和酶的活性。结合物与相应的抗原、抗体结合后，可根据加入相应的酶底物的颜色反应来判断有无相应的免疫反应，而且颜色的深浅与相应的抗原或抗体的量在一定的范围内成正比。由于抗原、抗体的反应在1 种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证实验结果的特异性与稳定性。了解实验原理后同时也必须做好实验的前期准备。

一、仪器准备：

酶标仪（ELISA Reader），微量可调加样器1套（10、20、100、200、1000 μL），恒温培养箱，pH 计，冲洗器，洗涤瓶，康氏管，50 mL烧杯，吸管。96孔酶标板或48孔酶标板。

二、试剂准备：

1）包被液：0.05 M pH9.6碳酸盐缓冲液（Na2CO3 1.59 g, NaHCO3 2.93 g, 加水至1000 mL，4℃可保存1周）。

2） 封闭液：5％ 脱脂奶粉或0.3％ BSA

3）洗涤液：0.15 M pH7.4 PBS-T（0.2 g KH2PO4,2.9 g Na2HPO4?12H2O,8 g NaCl, 0.2 g NCl,0.5mL Tween-20,加水至1000 mL，4℃保存）

4）底物液：pH5.0 的磷酸盐-柠檬酸缓冲液（0.1 M 柠檬酸24.3 mL，0.2 M磷酸盐25.7 mL，加水50 mL，混匀），临用前，在上述缓冲液中溶解40 毫克邻苯二胺（Ortho-Phenglendiaruine, OPD），然后加入30%双氧水0.15 毫升，底物对光敏感，需要避光并立即使用。

5） 阳性对照液：1：100用HAT培养基稀释的小鼠血清。阴性对照液为HAT培养基

6） 辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG 酶标结合物。

7） 2 M H2SO4

8） 抗原溶液