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劲马生物|动物血清的常见问题
更新时间:2024-06-21      阅读:424
  血清是细胞培养中的重要元素之一,在实验室操作中要注意及处理的方法:
 
  1.血清的保存
 
  血清应保存在-5℃~-2O℃。若存放于4℃,请勿超过一个月。若无法一次用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
 
  2.解冻血清的方法
 
  将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。(融解过程中必须规则地摇晃均匀)
 
  3如何处理血清解冻后的絮状沉淀物
 
  血清中沉淀物的出现有许多种原因,但普遍原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,也是造成沉淀物的主要原因之一,但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。
 
  想要去除这些絮状沉淀物,可将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液可接着加入培养基内一起过滤。(不建议以过滤的方法去除絮状沉淀物,因为可能会阻塞过滤膜)
 
  4.为什么要热灭活血清
 
  加热可以灭活补体系统,激活的补体参与溶解细胞,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
 
  5.做热灭活有必要吗
 
  实验显示,经过正确处理的热灭活血清,大多数的细胞不需要。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完-全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响血清质量,造成细胞生长速率的降低。经过热处理的血清,沉淀物的形成显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。(若非必要无需做此步骤,不但节省时间,也确保血清的质量)
 
  6.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀
 
  胎牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊,不会影响血清的质量。(推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融)
 
  7.避免沉淀物的产生
 
  ①解冻血清时,按照所建议的步骤逐步解冻(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。
 
  ②解冻血清时,请随时摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
 
  ③请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
 
  ④血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
 
  ⑤若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。⑥温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增加。
 
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