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分子生物学常用试剂的配制
更新时间:2009-12-18      阅读:3648

琼脂糖凝胶的配制
  根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖,加入相应电泳缓冲液中,用微波炉加热煮沸至琼脂糖*溶解,加入适量 EB 混匀,适当冷却后倾入凝胶铸槽中,插入梳子,凝胶厚度不超过梳孔,如有气泡产生则用玻璃棒驱除,不能过早拔除梳子,应待凝胶*凝结后才能拔除梳子。


3
P1P2P3的配制P1 的配制:在 800ml 去离子水中溶入 Tris  6.06gNa2EDTA?2H2O 3.72g,用 HCl 调整 pH  8.0,用去离子水调整容积至1,每升P1内加入RNaseA100mg

P2 
的配制:在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g20SDS 50ml,调整容积至 1 升。

P3 
的配制:在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g,用冰醋酸调整 pH 值至 5.5,用去离子水调整容积至1


4
.常用缓冲液:

TE
pH 7.4
10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 7.6
10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 8.0
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE(
亦称
 TEN)
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
0.05% Tween 20
电泳缓冲液

Tris-
乙酸(TAE):50×浓贮存液(每升):242g Tris 


5   7.1ml 
冰乙酸

100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。


Tris-
磷酸(TPE):10×浓贮存液(每升):108g Tris 

15.5ml 85
%磷酸(1.679g /ml

40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。


Tris-
硼酸(TBE):浓贮存液(每升):54g Tris 

27.5g 
硼酸
20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。


碱性缓冲液:使用液(每升):
5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

Tris-
甘氨酸:浓贮存液(每升):15.1g Tris 

94g 
甘氨酸(电泳级)(pH8.3

50ml 10%SDS
(电泳级)

2×SDS 
凝胶加样缓冲液

100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
200mmol/L 
二硫苏糖醇(DTT

4%SDS
(电泳级)

0.2
%溴酚蓝

20
%甘油


30
%丙烯酰胺:

29g 丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中,加热至37溶解之,补加

水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中

保存于室温。


10mol/L 
乙酸铵:

770g 乙酸铵溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。


1mol/LCaCl2

200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20


2.5mol/LCaCl2

20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20


1mol/L 
二硫苏糖醇(DTT):

20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20


0.5mol/LEDTA(pH8.0)

 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0,然后定容至1,分装后高压灭菌备用。


溴化乙锭(10mg/ml):

100ml水中加入1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其*溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。


1mol/LMgCl2

800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1,分装成小份并高压灭菌备用。


酚:氯仿:

把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液层,保存于4


磷酸缓冲盐溶液(PBS):

800ml蒸馏水中溶解8g NaCl0.2g KCl1.44gNa2HPO40.24gKH2PO4,用HCl调节溶液的pH 值至 7.4,加水定容至 1 升,高压蒸汽灭菌 20min。保存于室温。


乙酸钾溶液(用于碱裂解):

60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度5mol/L的溶液。


3mol/L 
乙酸钠(pH5.2  7.0)

800ml水中溶解408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH7.0,加水定容至1,分装后高压灭菌。


1mol/LTris

800ml水中溶解121.1gTris碱,加入浓HCl调节pH至所需值。

pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可zui后调定pH值,加水定容至1,分装后高压灭菌。


Tris 
缓冲盐溶液(TBS):

800ml蒸馏水中溶解8gNaCl0.2gKCl3gTris碱,加入0.015酚红并用HClpH值至7.4,用蒸馏水定容至1,分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡,于室温保存。


5mmol/LNH4Ac 
溶液:

秤取乙酸铵192.7g,加重蒸水250ml混匀,加重蒸水定容至500ml1.1kg/cm2灭菌20min


10mg/mlBSA
(小牛血清白蛋白)溶液:

秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4冰箱贮存备用。


10%
十二烷基硫酸钠(SDS):

900ml水中溶解100g 电泳级SDS,加热至68助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分装备用。

 

 

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