琼脂糖凝胶的配制
根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖,加入相应电泳缓冲液中,用微波炉加热煮沸至琼脂糖*溶解,加入适量 EB 混匀,适当冷却后倾入凝胶铸槽中,插入梳子,凝胶厚度不超过梳孔,如有气泡产生则用玻璃棒驱除,不能过早拔除梳子,应待凝胶*凝结后才能拔除梳子。
3.P1、P2、P3的配制P1 的配制:在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱
P2 的配制:在 950ml 去离子水中溶入 NaOH
P3 的配制:在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾
4.常用缓冲液:
TE
pH 7.4
10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 7.6
10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 8.0
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE(亦称 TEN)
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
0.05% Tween 20
电泳缓冲液
Tris-乙酸(TAE):50×浓贮存液(每升):
5 7.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸(TPE):10×浓贮存液(每升):
15.5ml 85%磷酸(
40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸(TBE):5×浓贮存液(每升):
使用时再稀释10倍。
碱性缓冲液:1×使用液(每升):5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸:5×浓贮存液(每升):
50ml 10%SDS(电泳级)
2×SDS 凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
200mmol/L 二硫苏糖醇(DTT)
4%SDS(电泳级)
0.2%溴酚蓝
20%甘油
30%丙烯酰胺:
将
水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中
保存于室温。
10mol/L 乙酸铵:
把
1mol/LCaCl2:
在200ml纯水中(Milli-Q水或相当级别的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-
2.5mol/LCaCl2:
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-
1mol/L 二硫苏糖醇(DTT):
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-
0.5mol/LEDTA(pH8.0):
在 800ml 水中加入
溴化乙锭(10mg/ml):
在100ml水中加入
1mol/LMgCl2:
在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至
酚:氯仿:
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液层,保存于
磷酸缓冲盐溶液(PBS):
在800ml蒸馏水中溶解
乙酸钾溶液(用于碱裂解):
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度5mol/L的溶液。
3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 7.0):
在800ml水中溶解
1mol/LTris:
在800ml水中溶解121.1gTris碱,加入浓HCl调节pH至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可zui后调定pH值,加水定容至
Tris 缓冲盐溶液(TBS):
在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱,加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4,用蒸馏水定容至
5mmol/LNH
秤取乙酸铵
10mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)溶液:
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置
10%十二烷基硫酸钠(SDS):
在900ml水中溶解