一氧化氮(NO)试剂盒说明书
硝酸还原酶法
一、实验仪器:
试管、微量移液器、旋涡混匀器、离心机、37°C 恒温水浴锅,可见分光光度计(550nm) 二、适用范围:
本试剂盒可测血清、血浆、培养细胞、培养液及动植物组织样本中 NO 含量 三、测定意义:
一氧化氮( NO )是近年来生命科学研究领域中zui热点课题之一,与心血管、神经、胃肠、泌尿、
免疫系统、肾病、肝病、糖尿病、肿瘤、创伤、感染、器管移植排斥反应和性功能调控等都有密切关 系。NO是一种新的免疫分子和炎症介质、介导内毒素、TNF、IL-1β、IL-6 等细胞因子的病理作用。
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NO化学性质活泼,体内代谢转化为亚硝酸盐(NO2 )和硝酸盐(NO3 ),血清NO2 与NO3 浓度之和 (NO2 + NO3 ),
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才能准确代表体内NO水平。血清 (NO2 +NO3 ) 含量测定,国内有的单位采用金属镉还原法,但该法操
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作繁琐 (血清需除蛋白),反应不易控制 (金属镉可将NO2 进一步还原),且不能完全将NO3 还原为NO2 ,
准确性差。 四、操作表:
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双 蒸 水 (ml) | 0.1 |
|
|
100μmol/L 标准应用液 (ml) |
| 0.1 |
|
样本 (ml) |
|
| 0.1 |
试剂一 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
试剂二 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
混匀,37℃准确水浴 60 分钟
试剂三 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
试剂四 (ml) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
充分旋涡混匀 30 秒,室温静置 10 分钟,3500~4000 转/分,离心 10 分钟,取上清显色。
上清(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
显色剂 (ml) | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
混匀,室温静置 10 分钟,蒸馏水调零,550nm,0.5cm 光径,测各管吸光度值。
五、计算公式:
1、血清(浆)中 NO 含量计算公式:
NO含量
测定OD值 − 空白OD值 标准品浓度 样品测试前
= × ×
(μ mol / L)
标准OD值 − 空白OD值
(100μ mol / L)
稀释倍数
2、组织样本中 NO 含量计算公式
NO含量
测定OD值 − 空白OD值
= ×
标准品浓度
待测样本蛋白浓度
÷
(μ mol / gprot*)
标准OD值 − 空白OD值
(20μ mol / L * *) ( gprot / L)