Western blot,又称蛋白质印迹或免疫印迹,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
Western blot技术的一般步骤是将经过SDS-PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。由于Western blot检测技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点,因此可检测到1-5 ng (zui低可到10-100 pg)中等大小的靶蛋白。同时,Western blot技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。