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一、目的
学习原代培养方法，从供体取得组织细胞后在体外进行的培养。
二、概述
组织块培养法是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法。可以采用剪切法，即将组织块剪切成小块后，接种于培养瓶，组织小块贴壁24h或更长时间后，细胞就从组织四周游出。但由于在反复剪切和接种过程中对组织块的损伤，并不是每个小块都能长出细胞。用于组织块培养的培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理，如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长。（本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例）
三、材料
（一）     仪器
1.     净化工作台
2.     恒温水浴箱
3.     冰箱（4℃、-20℃）
4.     倒置相差显微镜
5.     培养箱
（二）     玻璃器皿
1.     培养皿（Φ100mm）
2.     吸管（弯头）
3.     烧杯（500ml、200ml、10ml）
4.     广口试剂瓶（500ml）
5.     玻璃瓶（250ml、100ml）
6.     培养瓶
7.     废液缸
（三）     塑料器皿
1.     吸头
2.     枪头
3.     胶塞
4.     EP管
（四）     其他物品
1.     微量加样枪
2.     眼科组织剪（直尖、弯）
3.     眼科组织镊（直、弯）
4.     12.5cm组织镊（无钩、1×2钩）
5.     25cm敷料镊（无钩）
6.     止血钳（18cm直纹式、12.5cm直纹式、弯纹式）
7.     解剖剪
（五）     试剂
1.     D-Hanks液
2.     小牛血清
3.     RPMI1640
4.     双抗（青霉素、链霉素）
5.     1N HCl
6.     7.4%NaHCO3
四、操作步骤
1.     取材：打开胸腔，无菌操作下取出主动脉胸段，浸到预先配制好的含双抗（500u/ml青、链酶素）的D-Hanks液中漂洗。                                                                                                                                
2.     组织的冲洗、修剪：取出主动脉，用锋利的剪刀修剪除去周围组织，再用D-Hanks冲洗主动脉3次，除去血块及杂组织等。
3.     平滑肌组织分离：纵向剖开主动脉，撕下主动脉内层，取主动脉中层的平滑肌组织，无血清RPMI1640漂洗3次。
4.     剪切：将平滑肌组织用锋利的眼科剪反复剪切至剪成1mm3小块，在剪切过程中，可以适当向组织中滴加1～2滴培养液，以保持湿润。
5.     贴块：将剪切好的组织小块，用眼科镊送入培养瓶内，用弯头吸管将组织块均匀摆置，每小块间距0.5cm左右，组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内注入适量含10%牛血清培养液，盖好瓶盖。
6.     培养：将培养瓶瓶底朝上，37℃培养箱放置2～4h，待组织小块贴附后，将培养瓶慢慢翻转平放，静置培养。
7.     换液：原代培养3～5d，需换液一次，去除漂浮的组织块和残留的血细胞。  
组织块培养法也可不用翻转法，即在摆放组织块后，向培养瓶内仅加入少量培养液，以能保持组织块湿润即可，盖好瓶盖，放置37℃培养箱24h再补加培养液。
注意事项
1.     取材的组织尽快培养。因故不能即时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果组织块很大，应切成1cm3以下的小块再低温保存，但时间不能超过24h。
2.     从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材，可用含500～1000u/ml的青、链霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%达克宁注射液冲洗浸泡10min再作培养。
3.     组织块不易贴壁，可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶等。
4.     原代培养的1～2d内要特别注意观察是否有细菌、霉菌的污染，一旦发现，要及时清除。

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