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人(Human)甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)ELISA的性能及操作步骤
更新时间:2011-03-03      阅读:2776

试剂盒性能

1.   灵敏度:人(Human)甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990

2.   特异性:不与其它细胞因子反应。

3.   重复性:板内、板间变异系数均小于10%

操作步骤

1.   使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。

4.   甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6.   甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7.   每孔加入底物AB50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。

8.   取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9.   450nm波长处测定各孔的OD值。

 

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