长期以来,中枢神经系统疾病一直是困扰人类健康的一大难题。1992年,Reynodls
【 1】等从成年小鼠脑纹状体中分离出能在体外不断分裂增殖,且具有多种分化潜能的细胞群,并正式提出了神经干细胞(Neural stem cells, NSCs)的概念,从而打破了认为神经细胞不能再生的传统理论。NSCs的发现为中枢神经系统损伤疾病的治疗及其伤后功能重建带来了曙光。1997年 Mckay将 NSCs的概念总结为:具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力,能自我更新并可以提供大量脑组织细胞【 2】。随着 NSCs在医学和研究领域的应用逐渐增多,利用稳定的 NSCs细胞株,可以为关于 NSCs的深入研究包括细胞的活动、正常与非正常状态等,以及体外构建神经组织代谢性疾病和脑组织损伤的药物筛选模型,提供可靠的细胞资源,同时为研究工作节约宝贵的时间和培养费用。
本公司培养出品的取自 SPF级的孕龄 14天的 ICR小鼠(*军事医学科学院实验动物中心,许可证号:SCXK-(军)2007-004)胚胎大脑的 SVZ区,用 DFR03神经干细胞培养基(货号: M1024)进行原代培养。传代扩增至第二代冻存(DIV15),每支含 1×106个细胞。细胞经检测,镜下成球形生长(如图 1所示);单克隆实验及 Brdu染色证明其具备良好的增殖能力(如图 2,图 3所示);免疫荧光化学实验表明,该细胞能表达 NSCs的标志性蛋白 nestin(如图 4所示);5%胎牛血清诱导可分化称为神经元(neuron)、星形胶质细胞(astrocyte)(如图 5所示)。品名:ICR小鼠神经干细胞货号:C3016规格:1×106cells/管产品特性:
1. SPF级的孕龄 14天的 ICR小鼠胚胎大脑的 SVZ区
2. 在特定的已知成分的无血清培养基可自我更新,倍增时间小于 48小时。
3. 在体外具有多分化潜能
4.稳定的正常二倍体细胞。质量控制:本产品经过了细菌、真菌、霉菌、支原体检测。运输与保存:
本品使用 10%DMSO冻存液冷冻,采用干冰保存运输,收到细胞后,如果不立即复苏,请将细胞放入液氮中保存待用。切勿置于室温下,以免造成 DMSO损伤。细胞复苏方法:
取出冻存管后,投入 37℃水浴中,震荡解冻,酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入 5mlDFR03神经干细胞培养基, 1000转,离心 5分钟,弃去上清,在加入 5mlDFR03神经干细胞培养基,转入培养瓶中培养。产品承诺:
实验室研究结果表明,本株 ICR小鼠 SVZ来源的 NSCs体外增殖 10代后,仍能够保持神经干细胞良好的特性。建议使用本公司配套的培养基和正确的培养方法来解冻、传代,以此保证细胞具备良好的增殖和分化能力。使用:
本产品只提供给进一步的科研使用,不可应用于临床。附图(供参考)
图 1.体外培养 15天( DIV15),第二代 NSCs在培养基中悬浮成球生长图 2在 1%胶原水凝胶中 NSCs由单个细胞形成克隆球
图 3.BrdU荧光染色
图 4.原代 NSCs的 nestin染色阳性
图 5.由 NSCs诱导分化得到的神经元(β -tubulin III阳性 ,绿色)和星形胶质细胞( GFAP阳性,红色)
参考文献
【1】 Reynolds BA, Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system. Science,1992, 255(5052):1707-1710.
【2】 McKay R. Stem cells in the central nervous system. Science, 1997,276(5309):66