大鼠血红素氧合酶1试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                        

50管/48样

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

ELISA原理实验条件和技术要点:

在应用ELISA时，首先要清楚下面内容：1，是检测抗体还是抗原？2，检测的结果是定性还是定量？3，是否需要检测特异抗体的类型？4，所用抗体/单克隆抗体的亲和力怎样？

（1）检测抗原  zui常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法，其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难，特别是检测微生物的抗原，因为需要标记抗原，这对于某些抗原是很难做到的，甚至是不可能的。另外在竞争法中，酶标记的抗原与标本直接混合在一起，许多标本中含有酶抑制剂或蛋白A样物质，可影响ELISA的结果。

（2）检测抗体  检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法，这个方法常用于检测特异性IgG、IgA和IgM.。这个方法的*步是捕获所需要检测的一个种类的抗体，接下来是检测捕获的抗体是否是特异性抗原的抗体。间接ELISA在检测IgG时比较简单，但不适用于检测其他种类的抗体，因为血清中如果有特异IgG存在将与IgM或IgA等竞争结合抗原。

产品种类丰富：涵盖了百余种细胞因子类ELISA试剂盒, 重组细胞因子类蛋白（四千多种之多）及相关的多达250余种单克隆、多克隆抗体； 其产品*可满足科研的需要。

质量稳定可靠：其提供的试剂盒具有准确、灵敏度高、重复性好、特异性高等特点。

大鼠血红素氧合酶1试剂盒操作步骤

1.         标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。