鸡新城疫病毒抗体（NDV Antibody）酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：                                                          96T

80pg/ml-2000pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中新城疫病毒抗体（NDV Antibody）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫病毒抗体（NDV Antibody）水平。用纯化的鸡新城疫病毒（NDV）抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫病毒抗体（NDV Antibody），再与HRP标记的新城疫病毒（NDV）抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的新城疫病毒抗体（NDV Antibody）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫病毒抗体（NDV Antibody）浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.         标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。