犬白细胞介素6 ELISA试剂盒OD值的范围
    在ELISAzui后步骤中OD值的范围也是有一定讲究的，不容小觑。说到OD值范围，我公司业务员在售后问题的处理过程中也常会有客户咨询其范围是多少。其实是不一定的，我们以AβELISA为例，2以上就会偏饱和，变化不容易做出来，所以一般把model组控制在0.8-1.5，而control组的话基本跟空白差不多，不到0.1。
    所以，一般情况下我们会建议先做个标曲以及样品的梯度稀释，然后选择在标曲中间位置的样品稀释度作为以后的参照稀释度。
    同时，也与使用的detector有关，detector有自己的检测范围和线性范围。如果实验室使用的仪器，说明书上说检测范围是0~4，线性范围是0~3，但我们自己的实验结果显示的线性范围是0~2OD。如果只检测空白的没有经过处理的Elisa孔，大致在0左右。

犬白细胞介素6 ELISA试剂盒问题解析
    设计ELISA复孔检查时，是对同一个样品作两次稀释，再分别加到板上的两个孔，还是只稀释一次，然后吸取两次分别加到两个孔？前者似乎把稀释时的误差也考虑到了，但做出来的结果两个孔相关挺大的。而较常使用的是哪种稀释方法？
    为了减小误差，是先稀释再加样。而针对这位客户所遇到的疑问，我公司技术人员是这样解说的：
    1. 前者测的是稀释和移液的误差，后者只有移液误差。
    2. 一般都是稀释一次，分两孔吧。同浓度的分复孔。
    3. 由于是从同一原液稀释，一般不考虑稀释误差(稀释误差是存在的)，都是稀释到想要的倍数直接分孔(而不是一一稀释，这样可以使稀释误差减小)。
    4. 复孔是为了排除移液体积，板的影响，以及其他系统误差的，要求复孔的浓度是*的。稀释后分孔能满足此要求，一一稀释不能。

说明：
1．检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法
2．试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频繁使用时)。
3．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
4．中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。
5．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验注明：
1.  试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响zui后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

结果处理
    1.ELISA实验中样品都要做复孔或三孔，然后计算每个浓度标准品的平均OD值，复孔的变异系数应该小于20%。
　　2.平均OD值减去空白孔的OD值。
　　3.制作标准曲线。
　　以减去本底后的OD值为X轴，标准品的浓度为Y轴，利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图，比如CurveExpert 1.4。这款软件能够给出很多种方法(比如直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中选择一条zui合适的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据吻合，可以将标准品的浓度作为未知数，将对应的OD值带入该方程，计算出标准品的浓度，得到的结果应该与实际浓度很接近(+/-10%)。选择拟合度zui高的那条曲线。