鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）ELISA试剂盒实验思路
    在实验的可验证性中，现代科研的基本模式是假说驱动的，无法验证的假说难以进入科研活动过程，当然从大的历史条件下，如果只是因为技术上的困难而无法实现的假说另当别论。但是即使是这样，假说也必须具有理论上的可验证性。在科学发展的相对低级阶段，可验证性更为必要，尤其是作为普通科研人员，没有可验证性的思路往往难以产生发展的动力，更不要说有效的推广和应用。
    在ELISA试剂盒实验思路中，具体正确性也需要更多研究来验证的。而ELISA实验的技巧、经验、步骤方法等可验证性也是非常重要的，我公司在日后的售后技术指导中也不会松懈，继续保持!技术指导服务的完善对产品负责、对客户负责。

鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）ELISA试剂盒问题解析
    设计ELISA复孔检查时，是对同一个样品作两次稀释，再分别加到板上的两个孔，还是只稀释一次，然后吸取两次分别加到两个孔？前者似乎把稀释时的误差也考虑到了，但做出来的结果两个孔相关挺大的。而较常使用的是哪种稀释方法？
    为了减小误差，是先稀释再加样。而针对这位客户所遇到的疑问，我公司技术人员是这样解说的：
    1. 前者测的是稀释和移液的误差，后者只有移液误差。
    2. 一般都是稀释一次，分两孔吧。同浓度的分复孔。
    3. 由于是从同一原液稀释，一般不考虑稀释误差(稀释误差是存在的)，都是稀释到想要的倍数直接分孔(而不是一一稀释，这样可以使稀释误差减小)。
    4. 复孔是为了排除移液体积，板的影响，以及其他系统误差的，要求复孔的浓度是*的。稀释后分孔能满足此要求，一一稀释不能。

说明：
1．检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法
2．试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频繁使用时)。
3．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
4．中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。
5．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验注明：
1.  试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。更多详情请关注我司：www.shjmsw。。ｃｏｍ
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响zui后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

结果处理
    1.ELISA实验中样品都要做复孔或三孔，然后计算每个浓度标准品的平均OD值，复孔的变异系数应该小于20%。
　　2.平均OD值减去空白孔的OD值。
　　3.制作标准曲线。
　　以减去本底后的OD值为X轴，标准品的浓度为Y轴，利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图，比如CurveExpert 1.4。这款软件能够给出很多种方法(比如直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中选择一条zui合适的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据吻合，可以将标准品的浓度作为未知数，将对应的OD值带入该方程，计算出标准品的浓度，得到的结果应该与实际浓度很接近(+/-10%)。选择拟合度zui高的那条曲线。